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免费试用DNA染色剂
免费试用DNA染色剂
上传日期:2020-10-29 11:57:07

Neofect DNA transfection reagent 使用说明 

一、产品介绍  NeofectDNA transfection reagent研发合成的非脂质体阳离子聚合 物为主的转染试剂,是新一代的非病毒转染试剂。可以与DNA形成稳定的复合物,透过细胞膜进入细 胞内,并保护DNA免受核酸酶降解。该试剂对细胞毒性很小,可在含血清与抗生素的完全培养基中充 分发挥作用。对多数细胞都有较高的转染效率(不同种类细胞的转染效率可有明显差异 本品推荐用于贴壁动物细胞的转染,用于质粒等DNA的转染。 

二、产品特征 高效、低毒、广谱、操作简单。

三、实验流程(以6孔板为例) 

1.细胞铺 提前一天将细胞种植在六孔板中,以转染时细胞密度在60%80%为宜。 

2.转染过程 (1)在转染前2小时,移除细胞上原有的培养基,换为新鲜的完全培养基 (2)将2g质粒DNA用100无血清稀释液稀释,充分混匀后制成DNA稀释液。 注意:无血清稀释液建议采用Opti-meM,无血清dmem或150 0 mM NaCl溶液 (3)向DNA稀释液中直接加入2 Neofect,轻柔混匀,室温静置15-30分钟转染复合物制备完成 (4将转染复合物加入细胞培养基中,轻柔混匀 (5)继续培养24-48小时,收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。 

                                                                  不同细胞培养容器转染用量 

细胞培养容器表面积稀释液体积 DNA 的量Neofect™的量培养基总量
96-well0.3 cm10μl    0.1 μg0.1 μl100 μl
48-well0.7 cm20 μl    0.2 μg0.2 μl200μl
24-well1.9 cm50μl    0.5 kg0.5 μl500μl
12-well3.8 cm 250μl     1 μg1 μl1 ml
6-well/35   mm dish10 cm100 μl     2 μg2 ml
60 mm   dish/T25 flask21 cm200μl     4 μg4 μl4 ml
100mmdish/T75   flask58 cm500μl    10 μg10 μl10 ml

五、使用限制 本转染试剂仅限于科研用途 注:1)本产品对细胞非常温和在24况下转染后无需进行换液操作 2)使用本产品转染 相对于脂质体转染试在24小时开始进入表达高峰期,36小时到48小时达到表达高峰  NEOFECT 试剂,达到峰值的时间延后约6到12小时。  四、储存与安全 本品常温运输,储存于4℃,有效期18个月。